從人體血漿中提取酸性化合物的簡(jiǎn)便方式

*，制藥領(lǐng)域中許多生物分析化合物都是堿性的，可以通過(guò)疏水性或陽(yáng)離子交換吸附劑輕易地提取。不過(guò)，降脂他汀類和抗炎藥卻大多是酸性的。使用傳統(tǒng)的疏水性方法無(wú)法提取這些酸性化學(xué)物。因此，安捷倫開發(fā)出一種命名為Bond Elut Plexa PAX的新型聚合物強(qiáng)陰離子交換填料，專門用于簡(jiǎn)化該提取過(guò)程。

圖 1. 使用安捷倫 Bond Elut Plexa PAX 從血漿中提取酸性藥物。（放大 圖片）

簡(jiǎn)單通用的提取方法

我們開發(fā)了一種簡(jiǎn)單通用的方法，使用安捷倫 Bond Elut Plexa PAX 提取酸性化合物。為了評(píng)估該方法的性能，我們測(cè)定了吸附劑床的分析物回收率、提取樣品響應(yīng)的線性以及加標(biāo)血漿樣品分析的準(zhǔn)確性和度。

由于方法的驗(yàn)證過(guò)程非常耗時(shí)并且需要準(zhǔn)確度*的數(shù)據(jù)，因此只有速度快、回收率好、重現(xiàn)性高的固相萃取（SPE）方法才能令人滿意。如果能對(duì) SPE 過(guò)程進(jìn)行優(yōu)化且不損害數(shù)據(jù)完整性，便能夠簡(jiǎn)化和縮短方法的驗(yàn)證過(guò)程。Bond Elut Plexa 系列采用通用的方法，zui大程度縮減方法開發(fā)過(guò)程，同時(shí)還提高了分析靈敏度和重現(xiàn)性。

簡(jiǎn)便的流程

我們使用安捷倫 Bond Elut Plexa PAX 96 孔板和2% NH₄OH 、5% 甲酸進(jìn)行提取。圖 1 顯示了提取流程。將所有樣品蒸干，接著使用5 mM 80:20 的甲酸銨: CH₃OH 水溶液定容至 100 µL。然后在安捷倫 325-MS LC/MS（采用 vESI 離子源）儀器上進(jìn)行液相色譜/質(zhì)譜分析。

可重現(xiàn)的回收率

我們通過(guò)測(cè)定分析物響應(yīng)并將其與加標(biāo)流動(dòng)相標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行比較來(lái)計(jì)算回收率。由于提取效率低、離子抑制效應(yīng)或未洗脫導(dǎo)致的分析物損耗均會(huì)體現(xiàn)在回收率上。盡管一些回收率在 50% 至 60% 的范圍內(nèi)，但響應(yīng)是線性的，因?yàn)榉椒ǖ那€線性良好，準(zhǔn)確性高。所有藥物的回收率均高于 50%，且重現(xiàn)性良好，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）低于 7%（表 1）。

藥物 回收率 % % RSD （n=6） 阿托伐他汀 62 4.4 雙氯芬酸 52 3.7 速尿 96 6.1 酮基布洛芬 67 2.3 普伐他汀 95 3.4
表 1.安捷倫 Bond Elut Plexa PAX 提取酸性藥物的回收率。		圖 2.安捷倫 Bond Elut Plexa PAX 提取酸性藥物的回收線性良好。 （放大 圖片）		圖 3. 安捷倫 Bond Elut Plexa PAX 從人體血漿中提取的 50 ng/mL 樣品的色譜分析結(jié)果。（放大 圖片）

從 0.5 到 200 ng/mL 的線性良好（圖 2）.選擇 50 ng/mL 的中點(diǎn)濃度測(cè)定校正曲線的準(zhǔn)確度 （表 2）. zui后， 圖 3 顯示的樣品色譜結(jié)果展示了該方法有效性。

表 2. 校正曲線的準(zhǔn)確度。

Bond Elut Plexa PAX ——獲得較高回收率的簡(jiǎn)便方法

上述結(jié)果表明，安捷倫 Bond Elut Plexa PAX 使用此簡(jiǎn)便方法提取酸性化合物異常簡(jiǎn)單。更好的是，該吸附劑對(duì)所有化合物都能提供較高的回收率，人體血漿中 0.5 至 200 ng/mL 的藥物樣品能夠獲得良好的線性。此外，校正曲線也呈線性，一階線性回歸的相關(guān)系數(shù)均大于 0.995。對(duì)于所有化合物而言，該方法準(zhǔn)確性高，重現(xiàn)性好，大多數(shù)結(jié)果都在實(shí)際值的 ±10% 以內(nèi)，RSD 低于 15%。

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