液相色譜6大檢測器,一文教你搞定!

　　檢測器的作用是將色譜柱流出物中樣品組成和含量的變化轉化為可供檢測的信號，從而定性定量分析待測組分。對于大部分液相色譜操作人員來說，基本都掌握了儀器分析原理和操作方法，但對于儀器內部各部件的類型和適用條件不是非常熟悉，往往是有什么用什么，一概而定，尤其是檢測器，不同的檢測器其使用范圍有所不同，如果不熟悉檢測器而一味按照既定的實驗方法，可能會引起不必要的誤差甚至是實驗失敗。因此需要掌握不同檢測器的原理。液相色譜常用的檢測器包括紫外檢測器、熒光檢測器、示差折光檢測器、蒸發(fā)光散射檢測器、化學發(fā)光檢測器、質譜檢測器等。
 

　　紫外檢測器(UVD)
 

　　是目前液相色譜中應用*泛的檢測器。自然界中大部分有機物和部分無機物都具有紫外吸收能力，UV檢測器根據化合物對紫外光的吸收能力，通過二極管將光信號轉變?yōu)殡娦盘枺瑥亩M行分析。它有兩個流通池，一個作參比，一個作測量用，光源發(fā)出的紫外光照射到流通池上，若兩流通池都通過純的均勻溶劑，則它們在紫外波長下幾乎無吸收，光電管上接受到的輻射強度相等，無信號輸出。當組分進入測量池時，吸收一定的紫外光，使兩光電管接受到的輻射強度不等，這時有信號輸出，輸出信號大小與組分濃度有關。
 

　　使用過紫外檢測器的人應該都會發(fā)現，很多標準方法中都是以254nm作為檢測波長的，那為什么是這個波長呢？因為在液相色譜檢測器的發(fā)展過程中使用最久的是低壓汞燈，而汞的最大發(fā)射波長是253.7nm，也就是說在254nm波長下，燈能量最高，檢測靈敏度最好。但現階段，很多紫外檢測器采用的是氘燈，這時候254nm的檢測波長其實意義不大，氘燈的使用范圍一般是190-800nm，需要考慮化合物的最大吸收波長并且避開流動相的吸收干擾來選擇合適的檢測波長。這就限制了其流動相的選擇范圍，一般檢測波長要避開溶劑截止波長20nm以上。
 

　　熒光檢測器(FLD)
 

　　是目前液相色譜靈敏度最高的檢測器，應用廣泛，選擇性強。適用于能激發(fā)熒光的化合物。很多與生命科學有關的物質，如氨基酸、胺類、維生素、甾族化合物及某些代謝藥物都可以用熒光法檢測。熒光檢測器在生物樣品痕量分析中具有重要作用，尤其在用熒光衍生后，可以檢測很微量的氨基酸和肽。在實驗過程中需要嚴格脫氣，因為系統(tǒng)中殘留的氧氣會引發(fā)熒光淬滅反應，造成峰面積大幅下降甚至不出峰。
 

　　示差折光檢測器(RID)
 

　　是一種通用型檢測器，利用物質的折光效應，對所有物質均有響應，只要被測組分與洗脫液的折光指數有差別就可使用。生命科學中常遇到各類糖類化合物、脂肪烷烴等，沒有紫外吸收，一般常用示差折光檢測器。它的通用性比UVD廣，但靈敏度要低，對溫度變化敏感，是所有檢測器中對溫度要求最高的。另外，不同的流動相比例，其密度或者折光系數不同，如果流動相比例發(fā)生改變，則會引起基線的持續(xù)變化，因此示差折光檢測器只能采用等度洗脫，不能采用梯度洗脫，這也限制了它的使用。
 

　　蒸發(fā)光散射檢測器(ELSD)
 

　　也是一種通用型的檢測器，原理是利用光散射效應，可檢測揮發(fā)性低于流動相的任何樣品，通過霧化器去除溶劑，讓化合物形成懸浮顆粒，從而形成散射效應。ELSD靈敏度比RID高，對溫度變化不敏感，基線穩(wěn)定，可用于梯度洗脫，并且可在沒有標準品和化合物結構參數未知的情況下檢測未知化合物，但不能使用不揮發(fā)的鹽類溶劑，而要用醋酸銨之類的揮發(fā)性緩沖鹽來代替。現在ELSD已被廣泛應用于碳水化合物、類脂、脂肪酸和氨基酸、藥物以及聚合物等的檢測。
 

　　化學發(fā)光檢測器(CD)
 

　　化學發(fā)光檢測器是近年來發(fā)展起來的一種快速、靈敏的新型檢測器，因其設備簡單、價廉、線性范圍寬等優(yōu)點。其原理是基于某些物質在常溫下進行化學反應，生成處于激發(fā)態(tài)勢反應中間體或反應產物，當它們從激發(fā)態(tài)返回基態(tài)時，就發(fā)射出光子。由于物質激發(fā)態(tài)的能量是來自化學反應，故叫作化學發(fā)光。當分離組分從色譜柱中洗脫出來后，立即與適當的化學發(fā)光試劑混合，引起化學反應，導致發(fā)光物質產生輻射，其光強度與該物質的濃度成正比。該檢測器不需要光源，也不需要復雜的光學系統(tǒng)，只要有恒流泵，將化學發(fā)光試劑以一定的流速泵入混合器中，使之與柱流出物迅速而又均勻地混合產生化學發(fā)光，通過光電倍增管將光信號變成電信號，就可進行檢測。這種檢測器的最小檢出量可10-12g。
 

　　質譜檢測器(MSD)
 

　　也是一種通用型檢測器，在靈敏度、選擇性、通用性及化合物的分子量和結構信息的提供等方面都有突出的優(yōu)點。但它的昂貴操作費用和復雜性在一定程度上限制了它的推廣應用。理解了這些檢測器的原理可以幫助我們在實驗中更好地選擇和使用檢測器，更高效率地完成檢測任務。